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圓二色譜儀用于蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)有機(jī)化合物立體構(gòu)型研究

發(fā)布時(shí)間:2023-03-19 點(diǎn)此:481次

平面偏振光通過(guò)具有旋光活性的介質(zhì)時(shí),由于介質(zhì)中同一種旋光活性分子存在手性不同的兩種構(gòu)型,它們對(duì)平面偏振光所分解成的右旋和左旋圓偏振光吸收不同,出射時(shí)電場(chǎng)矢量的振幅不同,再次合成的偏振光不是圓偏振光,而是橢圓偏振光,從而產(chǎn)生圓二色性。


圓二色譜儀是用于推斷非對(duì)稱分子的構(gòu)型和構(gòu)象的一種旋光光譜。光學(xué)活性物質(zhì)對(duì)組成平面偏振光的左旋和右旋圓偏振光的吸收系數(shù)(ε)是不相等的,εL≠εR,即具有圓二色性。如果以不同波長(zhǎng)的平面偏振光的波長(zhǎng)λ為橫坐標(biāo),以吸收系數(shù)之差Δε=εL-εR為縱坐標(biāo)作圖,得到的圖譜即是圓二色光譜,簡(jiǎn)稱CD。如果某手性化合物在紫外可見區(qū)域有吸收,就可以得到具有特征的圓二色光譜。由于εL≠εR,透射光不再是平面偏振光,而是橢圓偏振光,摩爾橢圓度[θ]與Δε的關(guān)系為:[θ]=3300Δε。圓二色譜也可以摩爾橢圓度為縱坐標(biāo),以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)作圖。由于△ε有正值和負(fù)值之分,所以圓二色譜也有呈峰的正性圓二色譜和呈谷的負(fù)性圓二色譜。在紫外可見光區(qū)域測(cè)定圓二色譜與旋光譜,其目的是推斷有機(jī)化合物的構(gòu)型和構(gòu)象。


樣品要求


1、樣品必須保持一定的純度不含光吸收的雜質(zhì),溶劑必須在測(cè)定波長(zhǎng)沒(méi)有吸收干擾;樣品能完全溶解在溶劑中, 形成均一透明的溶液。


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3、緩沖液、溶劑要求與池子選擇:緩沖液和溶劑在配制溶液前要做單獨(dú)的檢查,看是否在測(cè)定波長(zhǎng)范圍內(nèi)有吸收干擾, 看是否形成沉淀和膠狀;在蛋白質(zhì)測(cè)量中,經(jīng)常選擇透明性極好的磷酸鹽作為緩沖體系。


4 樣品濃度與池子選擇

樣品不同,測(cè)定的圓二色光譜范圍不同,對(duì)池子大小 ( 光徑 ) 的選擇和濃度的要求也不一樣。蛋白質(zhì)CD光譜測(cè)量一般在相對(duì)較稀的溶液中進(jìn)行。


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