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發(fā)布時間:2024-05-17 點此:418次
高效液相色譜法自20世紀60年代問世以來,由于使用了高壓輸液泵、全多孔微粒填充柱和高靈敏度檢測器,實現(xiàn)了對樣品的高速、高效和高靈敏度的分離測定。高效液相色譜由于吸取了經(jīng)典液相色譜的研制經(jīng)驗,并引入微處理機技術(shù),極大的提高了儀器的自動化水平和分析精度?,F(xiàn)在用微處理機控制的高效液相色譜儀,其自動化程度很高,既能控制儀器的操作參數(shù)(如溶劑梯度洗脫、流動相流量、柱溫、自動進樣、洗脫液收集、檢測器功能等),又能對獲得的色譜圖進行收縮、放大、疊加,以及對保留數(shù)據(jù)和峰高、峰面積進行處理等,為色譜分析工作者提供了高效率、功能齊全的分析工具。
高效液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛,對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法分析測定,因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中,可用氣相色譜分析的約占20% ,而80% 則需用高效液相色譜來分析。HPLC因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析和分離高沸點且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點而被廣泛應(yīng)用于生物化學、藥物及臨床分析,世界各國己將該法收載于藥典。
特點:
1.高壓:液相色譜法以液體為流動相(稱為載液),液體流經(jīng)色譜柱,受到阻力較大,為了迅速地通過色譜柱,必須對載液施加高壓。一般可達150~350×105Pa。
2. 高速:流動相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多,一般可達1~10ml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經(jīng)典液相色譜法少得多,一般少于 1h 。
3. 高效:近來研究出許多新型固定相,使分離效率大大提高。
4.高靈敏度:高效液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測器,進一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達10-11g。另外,用樣量小,一般幾個微升。
5.適應(yīng)范圍寬:氣相色譜法與高效液相色譜法的比較:氣相色譜法雖具有分離能力好,靈敏度高,分析速度快,操作方便等優(yōu)點,但是受技術(shù)條件的限制,沸點太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進行分析。而高效液相色譜法,只要求試樣能制成溶液,而不需要氣化,因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大(大于 400 以上)的有機物(這些物質(zhì)幾乎占有機物總數(shù)的 75% ~ 80% )原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進行分離、分析。 據(jù)統(tǒng)計,在已知化合物中,能用氣相色譜分析的約占20%,而能用液相色譜分析的約占70~80%。