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液相色譜儀分析方法的開(kāi)發(fā)流程

發(fā)布時(shí)間:2024-05-28 點(diǎn)此:598次

我們作液相色譜儀分析先要查閱國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行標(biāo)或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn),并以此為依據(jù)進(jìn)行色譜分析。那么,要開(kāi)發(fā)一個(gè)液相色譜方法的話,往往是因?yàn)樵椒ǚ蛛x效果差;或者沒(méi)人做過(guò),查不到具體方法;再或者是未知化合物的方法開(kāi)發(fā)。我們今天就介紹一下液相色譜的方法開(kāi)發(fā)流程。

我們就以未知化合物為例。

分離模式的選擇

我們先測(cè)試樣品的溶解性:如果在烷烴試劑中溶解性好,那么可首選正相模式開(kāi)發(fā)方法,色譜柱主要以硅膠柱為主,流動(dòng)相可以選擇正己烷-乙醇、二氯甲烷-甲醇;

如果在二氯甲烷或乙醇中溶解性好,那么可以選用正相模式,或者反相模式中的純有機(jī)模式,色譜柱可以用硅膠柱、C18或C8,反相的流動(dòng)相可以用甲醇-乙腈、乙腈-二氯甲烷;

如果在水、甲醇或乙腈中溶解性好,那么可以選用反相模式、Hilic模式或離子交換模式,反相流動(dòng)相可以用水-甲醇、水-乙腈,HILIC的流動(dòng)相可以用乙腈-水,離子交換流動(dòng)相可以用緩沖鹽濃度梯度洗脫、或pH的梯度洗脫。

反相流動(dòng)相pH的選擇

如果是分析酸性化合物,我們選擇流動(dòng)相的pH應(yīng)低于其pKa至少2個(gè)pH單位;如果是分析堿性化合物,流動(dòng)相的pH應(yīng)高于其pKa至少2個(gè)pH單位。

檢測(cè)器的選擇

確定待測(cè)物結(jié)構(gòu)上是否有紫外強(qiáng)吸收化學(xué)鍵(異戊二烯),可以用DAD檢測(cè)器看一下紫外吸收強(qiáng)度范圍,選取合適的分析波長(zhǎng);如果結(jié)構(gòu)上沒(méi)有雙鍵,則不能用紫外檢測(cè)器,可以考慮示差折光檢測(cè)器(RI);如果待測(cè)物沸點(diǎn)較高(大于400℃),則可以選擇蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)或電噴霧檢測(cè)器(CAD);如果需要確定分子量,可以連接質(zhì)譜檢測(cè)器。

流動(dòng)相梯度或等度條件的確定

我們可以先跑一個(gè)大梯度,比如反相用水和乙腈流動(dòng)相,可以用乙腈的比例從5%逐漸增至95%,根據(jù)出峰情況,再去優(yōu)化放緩梯度。


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